恶性淋巴瘤骨髓受累的免疫表型特征

目的:探讨淋巴瘤骨髓受累的免疫表型特征。方法:采用流式细胞仪CD45/SSC设门方法对34例恶性淋巴瘤患者的骨髓标本进行检测,以骨髓涂片细胞学检查作阳性对照。收集骨髓受累患者的CD分子表达数据。结果:①对34例恶性淋巴瘤患者的骨髓应用流式细胞仪进行检测,发现23例阳性,阳性率67.65%(23/34),95%可信区间(51.92%,83.37%)。②该23例阳性患者中,非霍奇金淋巴瘤(NHL)19例,霍奇金淋巴瘤(HL)4例。NHL患者中B细胞来源免疫荧光单克隆抗体标记抗原出现频率最高的为CD19,CD20;T细胞来源标记抗原出现频率最高的为CD7。而在HL患者中出现频率最高的为CD9。结论:采用流式细胞仪CD45/SSC设门方法,发现非霍奇金淋巴瘤骨髓受累患者免疫表型特征为:B细胞来源:CD19、CD20;T细胞来源:CD7。霍奇金淋巴瘤为:CD9。     

乳腺癌多药耐药细胞MCF-7/ADR中Twist的表达与EMT现象的实验研究

目的：观察乳腺癌多药耐药细胞MCF-7／ADR中Twist表达及上皮-间质转化现象．探讨其与MCF-7／ADR侵袭转移能力增强的相关性。方法：分别以RT-PCR法、链霉亲和素-生物素酶复合物（Strept avidin biotin complex，SABC）免疫组织化学方法和Western blot法检测乳腺癌细胞系MCF-7及其多药耐药株MCF-7／ADR中介导EMT发生的转录因子Twist、上皮性标记基因E-钙粘素（E—cadherin）和间质性标记基因N-钙粘素（N—cadherin）表达的改变情况。结果：亲本细胞MCF-7中E—cadherin mRNA的表达和蛋白水平的表达均为阳性，Twist和N—cadherin表达阴性；多药耐药株MCF-7／ADR中E—cadherin mRNA和蛋白表达缺失，而在亲本细胞MCF-7中不表达的Twist和N—cadherin表达阳性。结论：在多药耐药乳腺癌细胞MCF-7／ADR中．其侵袭力增强可能与Twist介导的EMT发生有关。     

中心体相关激酶Nek2与乳腺癌前病变及早期癌变的相关性研究

目的:探讨中心体相关蛋白激酶Nek2蛋白及DNA水平在乳腺上皮恶变过程中各阶段的作用。方法:选取正常乳腺组织20例、重度不典型导管上皮增生/外周型乳头状瘤病伴导管上皮不典型增生20例、导管内癌20例,浸润性导管癌20例。采用免疫组织化学的方法分别检测4组样本组织冻切片Nek2蛋白的表达情况,采用荧光实时定量聚合酶链式反应检测4组样本组织Nek2拷贝数扩增情况。结果:Nek2蛋白表达在4组样本之间差异性显著(P=0.000)。荧光实时定量PCR结果显示Nek2的DNA拷贝数在各组之间的表达有统计学差异(P=0.000)。Nek2蛋白表达随着肿瘤恶性程度的提高而增加,同时DNA拷贝数随着肿瘤恶性程度的提高而扩增,二者存在正相关性(r=0.887,P<0.01)。结论:Nek2蛋白表达在导管内癌组显著高于癌前病变组,说明Nek2蛋白表达免疫组化检测结果可作为乳腺癌早期诊断和高危人群筛选的辅助指标。Nek2基因扩增同蛋白表达呈正相关性,变化趋势一致,提示蛋白过表达可能来自于基因扩增。Nek2异常同中心体异常变化趋势一致,作为中心体相关激酶,通过对中心体的调节作用,可造成中心体数量、结构和功能的异常,从而导致肿瘤的发生。     

水通道蛋白4调控恶性胶质瘤细胞凋亡的研究

Objective To investigate the effects of apuaporin 4 (AQP4) on apoposis of LN229 glioblastoma cells by AQP4 small RNA interference (siRNA) technology and the molecular mechanism.Methods AQP4 expression was knocked down in LN229 glioblastoma cells by AQP4 siRNA (scr/LN229 and siAQP4/LN229 cells). The expression level of AQP4 protein in LN229 cells was detected by Western blotting. Stable clones were used to measure cells survival ratio (6 days) by methyl thiazol tetrazolium ( MTT) assay. Flow cytometry (FCM) was used to examine the content of cytochrome C in siAQP4/LN229 and scr/LN229. Western blotting was used to measure the levels of cytochrome C, bcl-2 and Bad. Nu/Nu mice were subcutaneously injected with siAQP4/LN229 and scr/LN229 cells to study the growth of tumor in the two groups (20 mice in each group). Results Western blotting showed that the expression of AQP4 was decreased significantly; MTT assay suggested that the survival ratio was decreased with deficiency of AQP4: the survival ratio of scr/LN229 was (587.00 ±4.68)%, and the ratio of siAQP4/N229 was (317. 00 ± 26. 30)% at sixth day (P＜0. 05). The mean fluorescence density of cytochrome C in scr/LN229 and siAQP4/LN229 by FCM was (57.2 ± 16.64) and (468.8 ±46.9) respectively (P＜0.05). The relative intensity of cytochrome C and Bad in siAQP4/N229 cells was ( 1. 62 ±0. 16) and (1. 30 ±0. 24) respectively, and that in scr/LN229 cells was (0. 83 ±0. 29) and (0. 56 ±0. 21) respectively (P＜0. 05). The intensity of bcl-2 in siAQP4/N229 cells (0.53 ±0.03) was decreased compared to scr/LN229 cells (0. 73 ± 0. 12) ( P ＜ 0. 05). The subcutaneous mouse xenograft model showed that the mean tumor volume of scr/LN229 group was (402. 67 ±34. 27) mm3, and that of siAQP4/N229 group was (65. 15 ±32. 12) mm3 at the 6th week. Conclusion AQP4 can regulate apoptosis of glioblastoma cell line LN229, which may be related with the release of cytocherome C, Bad and bcl-2.     

miR －7对乳腺癌细胞骨转移的影响

目的：探讨miR－7抑制乳腺癌细胞骨转移的分子机制。方法转染含miR－7基因序列的GFP表达质粒进入MDA－MB－231乳腺癌细胞，荧光显微镜下检测外源基因的整合效率，Western blot方法检测PI3K、AKT－2、CXCR－4和MMP－9的蛋白表达量，Transwell体系检测乳腺癌细胞的迁移能力；建立乳腺癌骨转移模型，病理检查分析骨转移情况；miRNA靶基因预测软件分析miR－7潜在治疗靶点。结果荧光显示含GFP／miR－7基因的质粒被高效转入乳腺癌细胞，转染后癌细胞PI3K、AKT－2和CXCR－4的蛋白量均有明显降低（ P＜0.05， P＜0.01），MMP－9无明显变化（P＞0.05）；体内外模型均显示miR－7可抑制乳腺癌细胞的远位转移；miRNA靶基因预测软件分析显示PI3K是miR－7的潜在沉默靶点之一。结论 miR－7可能通过靶向沉默PI3K／AKT－2通路途径间接影响CXCR－4／SDF－1轴进而抑制乳腺癌细胞的骨转移。     

双特异性单克隆抗体在乳腺癌免疫治疗中的研究进展

免疫治疗作为乳腺癌的辅助治疗方法近年来已取得很大进展,作为免疫治疗新方法,双特异性单克隆抗体以其优势为治疗乳腺癌开辟了新领域.由于其含有两个能与不同抗原决定簇特异性结合的单克隆抗体片段,它可以同时结合肿瘤细胞相关抗原和血循环中免疫效应细胞的受体,因而能将循环血液中的免疫效应细胞引至肿瘤组织,并诱导免疫效应细胞产生抗肿瘤活性,杀伤肿瘤细胞.     

血管内皮抑制素对Calu-6裸鼠移植瘤的生物学效应

目的 探讨血管内皮抑制素对Calu-6裸鼠移植瘤生长及新生血管形成的影响.方法 在荷瘤裸鼠皮下注射不同剂量的血管内皮抑制素,观察注射后肿瘤体积的变化;应用免疫组化SABC法检测肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)、生存素(survivin)和环氧化酶-2(COX-2)蛋白的表达以及微血管密度(MVD)的变化;流式细胞术检测循环血管内皮细胞(CECs)的含量;应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和实时定量PCR检测外周血中CD146和CD105 mRNA的表达.结果经血管内皮抑制素治疗后,荷瘤鼠肿瘤体积明显减小;肿瘤组织中VEGF、survivin和COX-2蛋白的表达以及MVD均下降,且各治疗组与阳性对照组间的差异均有统计学意义(均P＜0.05);外周血中CECs、CD146和CD105 mRNA的含量均明显下降;活化CECs的含量与肿瘤组织中survivin和VEGF的表达以及MVD的变化均呈正相关.结论 血管内皮抑制素可通过下调移植瘤中VEGF、survivin和COX.2蛋白的表达以及减少MVD抑制肿瘤生长;活化CECs将可能作为理想的预测抗血管形成治疗预后的标记物应用于临床.     

法尼基转移酶抑制剂在抗肿瘤和逆转肿瘤耐药中的作用

法尼基转移酶抑制剂(FTI)是一类靶向作用于肿瘤细胞增殖、细胞信号转导途径的新药.它通过抑制细胞内包括Ras在内的蛋白法尼基化修饰,诱导细胞凋亡及抑制血管生成从而发挥抗肿瘤作用;通过抑制P糖蛋白(Pgp)的功能来逆转肿瘤的多药耐药(MDR).     

信号传导与转录活化因子3、血管内皮生长因子和Survivin在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨信号传导与转录活化因子3(STAT3)、血管内皮生长因子(VEGF)和Survivin蛋白在胃癌组织中的表达情况以及三者与胃癌临床病理特征的关系.方法 用免疫组织化学方法检测53例行胃癌根治切除的胃癌组织和53例正常胃组织中STAT3、VEGF和Survivin蛋白表达情况,并且分析3种蛋白表达与胃癌生物学行为的关系.结果 在本组53例胃癌标本中,STAT3、VEGF和Survivin蛋白的阳性表达率分别为58%、62%、74%,明显高于正常胃组织(P<0.01).胃癌组织中STAT3与VEGF、Survivin蛋白的阳性表达呈正相关(r=0.608、0.451,P<0.01),STAT3、VEGF的表达与病灶大小、Larren分型、有无淋巴结转移、临床分期有关(P<0.05),Survivin的表达与Larren分型、有无淋巴结转移、临床分期有关(P<0.05).多因素生存分析显示STAT3表达、有无淋巴结转移是预后的独立影响因素(OR=4.328、12.094,P<0.05).结论 STAT3通过上调VEGF和Survivin的表达促进胃癌组织中新生血管的形成、抑制肿瘤凋亡;STAT3可以作为判断胃癌预后的临床指标.